地方標(biāo)準(zhǔn)《動物尿液中α-受體激動劑的測定 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，主管部門為湖北省市場監(jiān)督管理局。

動物性食品中12種β-受體激動劑類藥物檢測技術(shù)規(guī)范酶聯(lián)免疫吸附法1范圍本文件規(guī)定了酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測動物性食品中12種β-受體激動劑類藥物殘留量的技術(shù)規(guī)范。本文件適用于豬肉、牛肉、羊肉中克倫特羅、沙丁胺醇、氯丙那林、特布他林、妥布特羅、溴布特羅、馬噴特羅、西布特羅、馬布特羅、班布特羅、西馬特羅和非諾特羅等12種β-受體激動劑類藥物總殘留量的測定。本文件方法的最低檢測限：豬肉、牛肉、羊肉中12種β-受體激動劑類藥物總殘留量的最低檢測限均為1μg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T33411酶聯(lián)免疫分析試劑盒通則3原理采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上包被克倫特羅抗原，試樣中殘留的β-受體激動劑類藥物與酶標(biāo)板上的克倫特羅抗原競爭克侖特羅抗體，加酶標(biāo)記的抗體后，顯色劑顯色，終止液終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀在450nm處測定吸光度,吸光值與12種β-受體激動劑類藥物殘留總量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出12種β-受體激動劑類藥物殘留量。T/SDAA0054－20214試劑或材料以下所用的試劑，除非另有規(guī)定外，僅使用分析純試劑4.1水，GB/T6682，三級。4.2氫氧化鈉（NaOH）4.3三氯乙酸（C2HCl3O2）4.4氫氧化鈉溶液：C(NaOH)=1mol/L，稱取氫氧化鈉（4.2）40.0g，加水溶解定容至1000mL。4.5三氯乙酸溶液：C(C2HCl3O2)=10g/L，稱取三氯乙酸（4.3）10.0g，加1000mL水溶解，搖勻。。4.6β-受體激動劑檢測試劑盒2℃～8℃保存。4.6.1包被有克侖特羅抗原的96孔板規(guī)格為12條×8孔。4.6.2克侖特羅抗體工作液4.6.3酶標(biāo)記物工作液4.6.420倍濃縮洗滌液4.6.5底物液A液4.6.6底物液B液4.6.7終止液4.6.8克侖特羅系列標(biāo)準(zhǔn)溶液6個(gè)濃度梯度，濃度分別為0μg/L、0.2μg/L、0.6μg/L、1.8μg/L、5.4μg/L、16.2μg/L。4.6.9洗滌工作液用水將20倍的濃縮洗滌液按1:19體積比進(jìn)行稀釋（1份20倍濃縮洗滌液+19份水），用于酶標(biāo)板的洗滌。2℃～8℃保存，有效期1個(gè)月。4.6.10底物液A、B混合液底物液A液、底物液B液按體積1:1充分混勻，混合液在5min內(nèi)使用，避免使用金屬盛裝、攪拌混合液。5儀器設(shè)備5.1酶標(biāo)儀配備450nm濾光片。5.2微量移液器單道20μL～200μL、200μL～1000μL微量移液器，8道50μL～300μL微量移液器。5.3均質(zhì)器轉(zhuǎn)速10000r/min～15000r/min。T/SDAA0054－20215.4微量振蕩器適用96孔板。5.5旋渦混合器5.6天平感量為0.01g。5.7離心機(jī)轉(zhuǎn)速≥4000r/min。6試樣制備樣品保存在-20℃冰箱中。取新鮮或解凍的空白樣品，剪碎，置于均質(zhì)器中以10000r/min～15000r/min高速均質(zhì)1min。7分析步驟7.1樣品處理稱取試樣2g±0.01g于50mL離心管中，加入4mL三氯乙酸溶液（4.5），充分混勻；4000r/min離心5min；取1mL上清液于新的離心管中，加入30μL氫氧化鈉溶液（4.4），渦動10s混勻；4000r/min離心5min；取50μL上清液進(jìn)行檢測。稀釋倍數(shù)為2倍。7.2測定步驟使用前將試劑盒置于室溫（19℃～25℃）下放置1h～2h。7.2.1按每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液分別至少做兩份平行試驗(yàn)計(jì)算，將所需數(shù)目的酶標(biāo)板條插入板架中，記錄各標(biāo)準(zhǔn)溶液和試液的位置。7.2.2加50μL各標(biāo)準(zhǔn)溶液（4.6.8）或試樣溶液到各自微孔中。7.2.2加入50μL抗體工作液（4.6.2）到每一微孔中，充分混勻，室溫下（25℃±2℃）避光反應(yīng)15min。7.2.3倒掉孔中液體，每孔加入260μL洗滌工作液（4.6.9），充分洗滌4次，每次浸泡15s～30s。7.2.4倒掉板孔中液體，將酶標(biāo)板倒置于吸水紙上，拍干；立即在每孔中加入100μL酶標(biāo)記物工作液（4.6.3），充分混勻，室溫下（25℃±2℃）避光反應(yīng)15min。7.2.5重復(fù)步驟7.2.3；7.2.6立即在每孔中加入100μL底物A、B混合液（4.6.10），充分混勻，室溫下（25℃±2℃）避光反應(yīng)15min～20min。7.2.7每孔中加入50μL終止液（4.6.7），充分混勻；終止后5min內(nèi)用酶標(biāo)儀在波長450nm處測定吸光度。T/SDAA0054－20217.3空白試驗(yàn)取試劑盒中提供的空白，按7.2測定步驟進(jìn)行。7.4質(zhì)控試驗(yàn)每次測定均應(yīng)做1個(gè)用空白試樣添加標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)控樣品。8結(jié)果計(jì)算和表述8.1相對吸光度值用標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液吸光度值與空白溶液吸光度值的比值進(jìn)行計(jì)算，見式（1）：Ar=BB0×100%…………………（1）式中：Ar—相對吸光度值，%；B—標(biāo)準(zhǔn)（或試樣）溶液的平均吸光度值；B0—空白的平均吸光度值。計(jì)算結(jié)果保留3位有效數(shù)字。8.2繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線以相對吸光度值（%）為縱坐標(biāo)，以各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（μg/L）的自然對數(shù)為橫坐標(biāo)，在半對數(shù)坐標(biāo)上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。每次試驗(yàn)均需新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。8.3樣品結(jié)果計(jì)算樣品中β-受體激動劑類藥物殘留總量以X表示，數(shù)值以微克每千克（μg/kg）表示，按式（2）計(jì)算：X=C×n…………（2）式中：C—從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查德的試樣溶液中的藥物濃度，單位為微克每升（μg/L）；n—試樣稀釋倍數(shù)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。T/SDAA0054－20219.交叉反應(yīng)克侖特羅：100%。氯丙那林：141%妥布特羅：80%溴布特羅、馬噴特羅：107%西布特羅：86.9%。沙丁胺醇：60.6%。馬布特羅：56.3%。特布他林：33.1%。班布特羅：18%。西馬特羅：14%。非諾特羅：10.6%。10.精密度10.1靈敏度本方法在豬肉、牛肉、羊肉樣品中β-受體激動劑類藥物殘留總量的檢測限均為1μg/kg。10.2準(zhǔn)確度本方法在1μg/kg～10μg/kg添加濃度水平上回收率均為60%～120%。10.3準(zhǔn)確度本方法的批內(nèi)變異系數(shù)≤20%，批間變異系數(shù)≤30%。

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬肉、豬肝、豬腎和牛肉中克侖特羅（clenbuterol）、萊克多巴胺（ractopamine）、沙丁胺醇（salbutamol）、西馬特羅（cimaterol）、馬布特羅（mabuterol）、妥布特羅（tulobuterol）、班布特羅（bambuterol）、馬賁特羅（mapenterol）、塞布特羅（cimbuterol）、齊帕特羅（zilpaterol）及福莫特羅（formoterol）等11種β-受體激動劑殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬肉、豬肝、豬腎和牛肉中

行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《飼料原料 血液制品中18中β-受體激動劑的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，主管部門為農(nóng)業(yè)農(nóng)村部。

行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《飼料中22種β-受體激動劑的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，主管部門為農(nóng)業(yè)農(nóng)村部。

行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《動物尿液中22種β-受體激動劑的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，主管部門為農(nóng)業(yè)農(nóng)村部。

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動物性食品中5種α2-受體激動劑的制樣和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬肌肉、肝臟和腎臟組織及雞肌肉和肝臟組織中替扎尼定、賽拉嗪、溴莫尼定、安普樂定和可樂定殘留量的測定。

國家標(biāo)準(zhǔn)《動物源性食品中多種B - 受體激動劑殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》由424-cnca（國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會）歸口上報(bào)及執(zhí)行，主管部門為國家市場監(jiān)督管理總局。

國家標(biāo)準(zhǔn)《動物源性食品中β-受體激動劑殘留檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》由424-caiq（中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院）歸口上報(bào)及執(zhí)行，主管部門為國家市場監(jiān)督管理總局。